Средоварка

Сайт о промышленной биотехнологии

Понедельник, 21.01.2019, 03:02
Меню сайта
Категории раздела
Биотехнология [13]
Микробиология [23]
Разные статьи [15]
Пищевая промышленность [25]
Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0
Главная » Статьи » Биотехнология

4. Колориметрические, манометрические и другие методы

4. Колориметрические, манометрические и другие методы

 

Колориметрические (фотометрические) методы

Для определения скорости многих ферментативных реакций ис­пользуются различные колориметрические методы. В основе этих методов лежит измерение при помощи визуального или фотоэлектрического колориметра окрашенного продукта, образую­щегося при взаимодействии субстрата или продукта действия фермен­та со специфическими реактивами, добавляемыми обычно в фиксированную опытную пробу, взятую после остановки ферментативной реакции. Эти методы весьма разнообразны, среди них известны такие, применение которых используется широко при различных по типу ферментативных реакциях. Так, колориметрическое опре­деление неорганического фосфата по Фиске и Суббароу приме­няется при исследовании активности многих ферментов, образующих или расщепляющих органические соединения фосфорной кислоты (например, АТФ-азы). При измерении активности ферментов, дей­ствующих на углеводы с образованием редуцирующих веществ, ча­сто применяют фотометрические методы определения закиси меди, возникающей при восстановлении реактивов, содержащих окисную медь. Наиболее ценными являются те фотометрические методы, которые позволяют следить во времени за ходом ферментативной реак­ции без ее прекращения по изменению окраски хромогенного суб­страта или добавленного индикатора. Так, нередко используют фотометрию имеющих желтую окраску моно- и динитрофенолят-ионов для измерения скорости реакций, связанных с увеличением или снижением концентрации Н+-ионов, а также с освобождением нитрофенолята при ферментативном расщеплении бесцветных слож­ных эфиров или гликозидов нитрофенолов соответствующими фосфатазами, эстеразами, гликозидазами и т. п.

 

Манометрические методы

Манометрические методы используются при определении актив­ности фермента в тех случаях, когда в исследуемых реакциях один из компонентов находится в газообразном состоянии. К таким реакциям относятся главным образом те, которые связаны с про­цессами окисления и декарбоксилирования, сопровождающимися поглощением или выделением кислорода и углекислоты, а также реакции, в которых выделение или связывание газа происходит в результате взаимодействия продуктов ферментативного превраще­ния с добавленным в систему реактивом (например, выделение СО2 из NаНСО3 при ферментативном образовании нелетучих кислот). Наблюдение за ходом реакции во времени проводят в специальных приборах — манометрических аппаратах Варбурга различных кон­струкций. Манометрические методы при соответствующих навыках работы успешно используют для серийных определений актив­ности ферментов. Подробное описание методов имеется в специаль­ных руководствах.

 

Другие методы

Наблюдение за кинетикой ферментативных реакций можно ве­сти также при помощи многих других физических и физико-химиче­ских методов, позволяющих следить за изменениями соответствую­щих параметров, идущими параллельно превращению субстрата. Сюда относится обширный ряд методов, включающих поляриметрию, вискозиметрию, потенцио- и кондуктометрические измерения и т. п.

Серийные определения активности ферментов по убыли субстра­та или появлению новых продуктов можно выполнять, пользуясь методами хроматографии и электрофореза на бумаге. Эти методы высокочувствительны и специфичны, что делает их во многих случаях незаменимыми; они позволяют значительно сокра­тить расход фермента на измерение активности. Однако при наблю­дении за ходом очистки ферментов эти методы не всегда применимы ввиду продолжительности разделения веществ в процессе хрома­тографии (и электрофореза) и их последующего количественного определения.

Для ознакомления с различными химическими и физическими методами определения активности ферментов можно рекомендовать руководство «Methods in Enzymology».

Источник: «Ферменты». Под ред. академика А. Е. Браунштейна. М., «Наука», 1964.

 

Категория: Биотехнология | Добавил: Irina (10.06.2015)
Просмотров: 784 | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
Имя *:
Email *:
Код *:
Вход на сайт
Поиск
Друзья сайта
  • Официальный блог
  • Сообщество uCoz
  • FAQ по системе
  • Инструкции для uCoz