Средоварка

Сайт о промышленной биотехнологии

Понедельник, 21.01.2019, 03:08
Меню сайта
Категории раздела
Строение клетки [2]
Микроорганизмы [4]
Стерилизация [6]
Питательные среды [4]
Практические занятия [7]
Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0
Главная » Статьи » Микробиология » Питательные среды

Питательные среды (М - П)
Питательные среды (М - П)


Питательные среды (С – Щ)
Питательные среды (П – С)
Питательные среды (А – М)


Мясопептонный бульон (МПБ). К мясной воде прибавляют 1% пептона и 0,5% х. ч. натрия хлорида, кипятят на слабом огне 10-15 мин до полного растворения пептона и соли, устанавливают нужный рН и снова кипятят 30-40 мин до выпадения осадка. Фильтруют, доливают до первоначального объема водой и стерилизуют 20 мин при 0,7 атм и 120°.

 

 

Мясопептонный желатин (МПЖ). Среда искусственная, твёрдая, общего назначения. Это плотная питательная среда, для приготовления которой используют сухой желатин. Желатин —  вещество белковой природы, кислый азотсодержащий продукт, добываемый путём вываривания костей, хрящей. Для приготовления МПЖ к 1 л МПБ добавляют 100-150 г желатина, настаивают несколько часов для набухания желатина и затем нагревают до его полного растворения. Используют щелочь для доведения реакции среды до слабощелочной. Фильтруют горячую среду через складчатый бумажный фильтр, разливают в колбы и стерилизуют дробно текучим паром в аппарате Коха. Применение МПЖ ограничено в связи с тем, что он разжижается под действием протеолитических ферментов, выделяемых многими микроорганизмами. Кроме того, образуемый желатином гель плавится уже при 23-25º и застывает при 20º и ниже, а большинство микробов развивается при 30-37º. Используют для выявления культуральных и биохимических признаков идентифицируемых микроорганизмов.

 

Обезжиренное молоко. Для приготовления питательных  сред употребляют снятое молоко, так называемый обрат (жир в молоке неблагоприятно влияет на рост некоторых микроорганизмов). Обрат получают сепарированием молока, нагретого до 34°. Жир можно удалять и при  отстаивании молока. При стерилизации  молока следует учитывать, что его  нельзя длительное время выдерживать в  автоклаве, так как лактоза (молочный сахар), содержащаяся в молоке, может  карамелизоваться. Обезжиренное молоко разливают в стерильные пробирки и  выдерживают при 115° (давление 0,5 атм) 15 мин. Перед стерилизацией кислотность обрата не должна превышать 22° Тернера, иначе молоко свернется. После стерилизации его выдерживают трое суток в термостате при 30°, чтобы спровоцировать развитие спорообразующих и других стойких к нагреванию форм. Через 3 дня каждую пробирку с  молоком просматривают и пробирки, в которых развились  микроорганизмы, выбраковывают. При стерилизации в автоклаве иногда наблюдается побурение молока вследствие карамелизации молочного сахара и пептонизации казеина. При длительной стерилизации на дно пробирки выпадает осадок казеина, который может  частично пептонизироваться. Перегретое побуревшее молоко в качестве среды использовать нельзя.

 

Овощная среда. На 900 мл дистиллированной воды: сок овощной или томатный — 100 мл; СаСО3 — 5 г; агар — 17 г. Приготовление среды: 17 г агара заливают 900 мл дистиллированной воды, расплавляют в водяной бане, затем фильтруют через два слоя марли и добавляют сок, СаСО3. Готовую смесь тщательно перемешивают, доводят объем среды до 1 л дистиллированной водой, разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве при 1 атм 40 мин.

 

Овсяная среда. Вариант 1. На 1 л дистиллированной воды, г: овсяная крупа — 100; агар — 17. Приготовление: 100 г овсяной крупы (или 50 г овсяных хлопьев) заливают 600 мл дистиллированной воды, помещают в водяную баню и выдерживают 40 мин (с момента закипания), затем фильтруют через два слоя марли. На водяной бане в 400 мл дистиллированной воды расплавляют 17 г агара, после чего овсяную вытяжку смешивают с отфильтрованным агаром, доводят объем среды до 1 л, разливают в колбы или в биологические пробирки (по 20 мл в каждую) и стерилизуют 40 минут при давлении пара в 1 атм. После стерилизации среду скашивают, размещая пробирки под углом 35-40° так, чтобы верхний уровень среды не касался пробки.

 

Овсяная среда. Вариант 2. На 1 л дистиллированной воды, г: овсяные хлопья — 100; агар — 10. Приготовление: 100 г овсяных хлопьев в течение 20 минут варят в литре дистиллированной воды, полученную массу фильтруют через слой марли, в фильтрат добавляют 10 г агара и доводят до литра. Среду разливают в пробирки. Режим стерилизации: 1 атм. 40 минут.

 

Основной раствор пептона. На 1 л дистиллированной воды, г: пептон сухой — 100; натрия хлорид — 50; калия нитрат — 10; натрия карбонат — 25. рН 8,4 ± 0,1. В холодную дистиллированную воду погружают пептон, хлорид и карбонат натрия. Смесь кипятят при постоянном помешивании до полного растворения пептона, не допуская его пригорания, затем добавляют нитрат калия. Проверяют реакцию среды, если нужно, рН доводят до 8,5 ± 0,1. Раствор фильтруют через миткалевый или бумажный фильтр, разливают в посуду и стерилизуют в автоклаве 20 мин. при 1 атм. Основной раствор пептона сохраняется до 2 лет.

 

Пептонная вода. Среда искусственная, жидкая, элективная. Для ее приготовления к 1 л  воды добавляют 40 г пептона и 5 г NaCl, растворяют при нагревании, фильтруют, разливают в колбы и автоклавируют. Используют для выращивания аммонифицирующих (гнилостных) бактерий.

 

Пептонная вода с теллуритом калия. В 1%-ю пептонную воду (рН 8,5 ± 0,1) после автоклавирования добавляют теллурит калия в конечном разведении 1:100000 или 1:200000. Предварительно готовят рабочий 0,1%-й раствор теллурита калия (1:1000). Срок хранения рабочих растворов 7 дней.

 

Пивное сусло. Зерна ячменя замачивают в холодной воде и проращивают при 35°. После того как ростки будут вдвое больше  длины зерна, последнее высушивают до воздушно-сухого состояния (можно при слабом подогревании) и получают солод. Для приготовления сусла солод  крупно размалывают и 250 г его берут на 1 л воды. Смесь подогревают при 57° (для лучшего выделения фермента амилазы) до исчезновения реакции на крахмал (синее окрашивание с йодом). Пробы  на осахаривание крахмала проводят в  фарфоровой чашке в капле жидкости. Сусло  процеживают через вату, затем фильтруют через бумажный фильтр. Такое  сусло содержит 10-20% сахара. Определив  его содержание по плотности раствора с помощью сахариметра, сусло разбавляют водой до концентрации  сахара 6-8%, стерилизуют при 115° (давление 0,5 атм) в течение 30 мин. Готовое  сусло можно получить на пивоваренном заводе.

 

Питательный агар для грибов (агар Чапека). На 1 л раствора, г: сахароза — 30; NaNO3 — 3; KH2PO4 — 1; MgSO4·7H2О — 0,5; KCl — 0,5; FeSO4·7H2O — 0,01; агар — 15. На дно колбы насыпать агар (можно брать поллитровые обычные бутылки, тогда на 1 литр среды необходимы 3 бутылки, в каждую их которых насыпать 1/3 агара, т.е. 5 г) и залить раствором солей. Колбу или бутылки поставить в автоклав на стерилизацию на 20 минут. После стерилизации, покачивая колбу, тщательно перемешать содержимое, иначе агар останется на дне, и застынет только нижний слой среды. В боксе среду разлить по стерильным чашкам Петри или пробиркам. Проверить на бактериальное заражение, выдержав 3-4 дня при комнатной температуре. В дальнейшем лучше хранить в холодильнике, так как там среда меньше испаряется. 

Питательный агар со стрептомицином. Готовят из расчета содержания 100 мкг стрептомицина на 1 мл питательного агара, приготовленного по стандартной прописи. Стерильно на стерильной дистиллированной воде готовят раствор стрептомицина в концентрации 10 мг на 1 мл. В готовый питательный агар, отмеренный по объему и остуженный до температуры (45-49)°, вносят приготовленный стерильный раствор стрептомицина из расчета 0,1 мл на 10 мл питательного агара. Разливают в пробирки для приготовления скошенного агара. Повторное расплавление питательной среды со стрептомицином запрещается.

 

Питательный желатин. К готовому бульону прибавляют 10-15% желатина, подогревают до его расплавления (не кипятят!), разливают в стерильную посуду и стерилизуют текучим паром.

Полужидкая среда с лактозой. В 1 л дистиллированной воды растворяют 10 г пептона, 5 г натрия хлористого, 4-5 г агара, доводят до кипения, устанавливают рН 7,2-7,4, добавляют 1 мл 1,6%-ного спиртового раствора бромтимолового синего. Стерилизуют при (120 ± 2)° 20 мин. В расплавленную среду вносят 5 г лактозы, нагревают до кипения, разливают в стерильные пробирки на высоту 3-5 см и стерилизуют при (112 ± 2)° 12 мин. Срок хранения — не более 2 недель при комнатной температуре. Правильно приготовленная среда зеленого цвета с синеватым оттенком (цвет бутылочного стекла). При образовании кислоты цвет среды изменяется на желтый.

 

Полужидкий агар. Среда синтетическая, полужидкая, общего назначения. Для её приготовления 0,1 г агара растворяют в 100 мл воды при кипячении, фильтруют и автоклавируют. Используют для прямого подсчета числа микроорганизмов в почве по Виноградскому.

 

 

Источники: med-books.info, referat.yabotanik.ru, zakonprost.ru, practice.biotechnolog.ru, agrosbornik.ru, docload.ru, neznaniya.net

 

 

 

 

Категория: Питательные среды | Добавил: Irina (10.07.2013)
Просмотров: 4929 | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
Имя *:
Email *:
Код *:
Вход на сайт
Поиск
Друзья сайта
  • Официальный блог
  • Сообщество uCoz
  • FAQ по системе
  • Инструкции для uCoz