Средоварка

Сайт о промышленной биотехнологии

Понедельник, 21.01.2019, 01:55
Меню сайта
Категории раздела
Строение клетки [2]
Микроорганизмы [4]
Стерилизация [6]
Питательные среды [4]
Практические занятия [7]
Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0
Главная » Статьи » Микробиология » Питательные среды

Питательные среды (П - С)
Питательные среды (П - С)


Питательные среды (С – Щ)
Питательные среды (М – П)
Питательные среды (А – М)

 

 


Полужидкий питательный агар. Готовят следующим образом: 15 г сухого питательного бульона и 3 г агара растворить при нагревании в 1 л дистиллированной воды. Довести рН до 7,0-7,2, разлить в пробирки и стерилизовать автоклавированием при 121° в течение 15 мин.

 

Раствор Кнопа. В качестве среды для культивирования зеленых водорослей можно использовать раствор Кнопа. На 1 литр раствора, г: Ca(NO3)2 — 0,25; MgSO4·7H2O — 0,06; KH2PO4 — 0,06; KCl — 0,08; Fe2Cl6 — одна капля 1% раствора (можно заменить раствором хелатного железа из среды МС, 50 мл маточного раствора). На растворе Кнопа можно также выращивать и ряску.  

Ржаная среда. На 1 л дистиллированной воды, г: рожь — 100, сахароза — 5, агар — 17. Среду готовят так же, как и ржано-овощную, но без добавления сока и СаСО3.

 

Ржаная среда по Кейтену. 60 г семян ржи заливают одним литром дистиллированной воды и оставляют на 36 часов. Через 36 часов фильтрат сливают и сохраняют. Разбухшие семена ржи заливают свежей порцией дистиллированной воды 300-400 мл, и эту массу кипятят на слабом огне 1 час с момента закипания. За 15 минут до окончания кипячения добавляют 15 г агара. Полученную массу фильтруют через несколько слоев марли и осадок выбрасывают. К фильтрату добавляют исходную жидкость, полученную после замачивания семян ржи, 20 г сахарозы и фильтрат доводят до одного литра дистиллированной водой. Подготовленную среду разливают в пробирки и автоклавируют при 1 атм 40 минут.

 

Ржано-овощная среда. На 950 мл дистиллированной воды: сок овощной или томатный — 50 мл; рожь — 100 г; СаСО3 — 5 г; сахароза — 5 г; агар — 17 г. Приготовление среды: 100 г ржи помещают в колбу из термостойкого стекла, заливают 500 мл дистиллированной воды, запаривают в автоклаве под текучим паром при 0,5 атм 50 мин. После охлаждения содержимое колбы фильтруют через два слоя марли. В 450 мл дистиллированной воды расплавляют 17 г агара в водяной бане, затем смешивают ржаную вытяжку с отфильтрованным агаром, добавляют сок, сахарозу и СаСО3 и доводят объем среда до 1 л дистиллированной водой. Среду разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве при 1 атм 40 мин.

 

Среда Гамборга (B5). На 1 л среды, мл: раствор макроэлементов — 50; раствор микроэлементов — 10; раствор хелатного железа — 5; раствор витаминов и органических веществ — 10. На 1 л раствора макроэлементов, г: (NH4)2SO4 — 2,68; KNO3 — 50; CaCl2·2H2O — 3; MgSO4·7H2O — 5; NaH2PO4·H2O — 3. На 1 л раствора микроэлементов, мг: KJ — 75; H3BO3 — 3300; MnSO4·H2O — 1000; ZnSO4·7H2O— 200; Na2MoO4·2H2O— 25; CuSO4·5H2О — 25; CoCl2·6H2O— 2,5. На 1 л раствора хелатного железа, г: FeSO4·7H2O — 5,56; Na2ЭДТА·2H2O — 7,46. На 1 л раствора витаминов и органических веществ, г: мезоинозит — 10; никотиновая кислота — 0,1; пиридоксин-HCl  — 0,1; тиамин-HCl — 1. Добавлять в виде порошка в среду перед варкой на 1 л среды, г: сахароза — 30; агар  — 7. рН готовой среды 5,5.

 

Среда для культивирования конидий возбудителя фитофтороза картофеля. Для массового выращивания инфекции можно использовать стерильные зерна ржи. Зерна перебирают, чтобы освободить их от шелухи и больных, затем тщательно моют в теплой воде и высушивают. Высушенное зерно засыпают по 50 г в колбы емкостью 500 мл и заливают 100 мл водопроводной воды. Затем колбы закрывают пробками, завязывают и автоклавируют в течение 30 мин при давлении 1,5 атм. Посев гриба на стерильную рожь осуществляется следующим образом: в колбу с зерном заливают суспензию, приготовленную из содержимого пробирок. В пробирку с культурой гриба наливают стерильную дистиллированную воду, тщательно встряхивают, после чего ее содержимое (суспензию) выливают в колбу с зерном. На каждую колбу требуется одна пробирка десятидневной культуры гриба. Колбы с посевом культуры хранят при температуре 18-19°. Хороший рост гриба отмечается на 7-10-й день после посева. Для приготовления суспензии в колбу с культурой наливают дистиллированную воду, встряхиванием колбы добиваются отделения конидий от конидиеносцев, затем суспензию просматривают под микроскопом для подсчета инфекционной нагрузки.

 

Среда для определения декарбоксилаз и дигидролаз аминокислот. На 1 л дистиллированной воды, г: пептон — 5; дрожжевой экстракт — 25 (сухой 3); глюкоза — 1; натрия хлорид — 5; натрия карбонат — 0,1; бромтимоловый синий (0,1%-й раствор в 20%-м спирте) — 45 (0,045 г сухого); аминокислота — 10-20. рН 6,4 ± 0,1. Все ингредиенты по прописи вышеуказанной среды растворяют при нагревании, устанавливают рН 6,4 ± 0,1, затем добавляют соответствующий индикатор и делят среду на 4 равные части. В одну часть аминокислоты не добавляют, эта порция служит контролем. В остальные порции вносят соответственно: в первую — 1% лизина, во вторую — 1% орнитина, в третью — 1% аргинина. Аминокислоты должны быть в L-форме, если имеются D-аминокислоты, то добавляют 2%, т.к. микроорганизмы активны только в отношении L-форм. После добавления аминокислот перед стерилизацией в случае необходимости реакцию среды исправляют 0,1%-м раствором соляной кислоты. Среду разливают по 1-2 мл в химически чистые стерильные пробирки и стерилизуют при давлении 0,1-0,2 атм. 20 мин. Небольшое количество флокулята в средах не имеет значения. Пептонно-дрожжевая среда имеет травянисто-зеленый цвет, при кислой реакции среда желтеет, при щелочной — синеет.

 

Среда Кельмана. Эта среда используется главным образом для выделения P. solanacearum из растительного материала. Добавление в эту среду 2,3,5-трифенилтетразолия хлорида (ТТХ) делает её пригодной и для выделения из почвы, но чувствительность её в этом случае не очень высокая (млн. клеток/мл) из-за недостаточной селективности. На 1 л среды: глюкоза — 5 г, пептон — 10 г, гидролизат казеина — 1 г, 1 %-ный водный раствор ТТХ — 5 мл. ТТХ стерилизуется отдельно в виде 10 % раствора (5 мин, 1 атм) и добавляется в среду перед посевом (в расплавленный и остуженный до 40-50° агар). Глюкоза в среде может быть заменена глицерином. Колонии P. solanacearum на этой среде имеют следующий вид: кремово-белые, слизистые, растекающиеся со слабо приподнятым розоватым центром (окраска может быть ярче – до оранжево-красной) и большими белыми краями. Колонии редко бывают правильной формы, гораздо чаще имеют неровные края, а розовый центр имеет окраску по спирали. Такой вид колоний характерен для вирулентных форм. Невирулентные формы на этой среде маслянистые, кремово-белые в начале развития, затем красные с небольшими голубоватыми краями. Для выделения из растительного материала возбудителя бурой гнили можно использовать также обычные питательные среды, применяемые для выделения грамотрицательных фитопатогенных бактерий, а именно: картофельный агар с генциан-виолетом, пептонно-дрожжевую и сахарозо-пептонную среды, а также среды с 1-тирозином.

 

Среда Клиглера. На 1 л 1,5-1,7%-й мясопептонного агара или другого слабощелочного питательного агара: лактоза — 10 г; глюкоза — 1 г; 2%-й раствор сернокислого закисного железа — 10 мл; 0,8%-й раствор тиосульфата натрия — 10 мл; 0,4%-й раствор сульфата натрия — 10 мл; 1%-й раствор фенолового красного — 24 мл. рН 7,3 ± 0,1. Вначале в расплавленном питательном агаре (рН 7,7 ± 0,1) растворяют углеводы, затем к нему добавляют свежеприготовленные растворы железа и солей натрия согласно прописи среды (индикатор на сероводород). Кроме того, для регистрации кислотообразования добавляют индикатор феноловый красный. Среду варят, фильтруют, разливают по 5-7 мл в стерильные пробирки, стерилизуют 20 мин при давлении 0,5 атм. и скашивают по типу среды Ресселя; рН готовой среды 7,3 ± 0,1; цвет красный.

 

Среда Кодама. В 1%-ю пептонную воду добавляют 0,5% растворимого крахмала. Среду разливают в стерильные пробирки и стерилизуют 20 мин. под давлением 0,5 атм. Для оценки результатов расщепления крахмала используют реактив Люголя.

 

Среда Мурасиге-Скуга. На 1 л среды, мл: раствор макроэлементов — 50; раствор микроэлементов — 5; раствор хелатного железа — 5; раствор витаминов и органических веществ — 5. На 1 л раствора макроэлементов, г: NH4NO3 — 33; KNO3 — 38; CaCl2·2H2O — 8,8; MgSO4·7H2O — 7,4; KH2PO4 — 3,4. На 1 л раствора микроэлементов, мг: KJ — 166; H3BO3 — 1240; MnSO4 · H2O — 4460; ZnSO4·7H2O — 1720; Na2MoO4·2H2O — 50; CuSO4·5H2О — 5; CoCl2·6H2O — 5. На 1 л раствора хелатного железа, г: FeSO4·7H2O — 5,56; Na2ЭДТА·2H2O — 7,46. На 1 л раствора витаминов и органических веществ, г: мезоинозит — 20; никотиновая кислота — 0,1; пиридоксин-HCl  — 0,1; тиамин-HCl — 0,1; глицин — 0,4. Добавлять в виде порошка в среду перед варкой на 1 л среды, г: сахароза — 30; агар  — 7. рН готовой среды  — 5,6-5,8. Для получения стерильных проростков на 1 литр среды берут 1/2 часть маточных растворов, т.е. вместо 50 мл раствора макроэлементов берут 25 мл и т.д.

 

 

Источники: med-books.info, referat.yabotanik.ru, zakonprost.ru, practice.biotechnolog.ru, agrosbornik.ru, docload.ru, neznaniya.net

 

 

 

 

Категория: Питательные среды | Добавил: Irina (12.07.2013)
Просмотров: 3234 | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
Имя *:
Email *:
Код *:
Вход на сайт
Поиск
Друзья сайта
  • Официальный блог
  • Сообщество uCoz
  • FAQ по системе
  • Инструкции для uCoz