Средоварка

Сайт о промышленной биотехнологии

Понедельник, 21.01.2019, 02:13
Меню сайта
Категории раздела
Строение клетки [2]
Микроорганизмы [4]
Стерилизация [6]
Питательные среды [4]
Практические занятия [7]
Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0
Главная » Статьи » Микробиология » Питательные среды

Питательные среды (С - Щ)

Питательные среды (С - Щ)


Питательные среды (П – С)
Питательные среды (М – П)
Питательные среды (А – М)

 

Среда Прата.  Для хранения коллекции культур водорослей. Длительно выдерживать зеленые водоросли без пересева не рекомендуется, так как водоросли могут прекратить свой рост в результате самоотравления продуктами жизнедеятельности. Признаками такого угнетения могут служить пожелтение культуры, появление белесого оттенка на среде и ее помутнение. Сохранить коллекцию водорослей можно на твердых питательных средах, где рост культуры замедлен, поэтому частые пересевы не требуются (раз в месяц, а если хранить при слабом рассеянном свете при температуре 10-15°, то и раз в два месяца). На 1 л раствора, г: КNO3 — 0,10; MgSO4·7H2O — 0,01; K2HPO4 — 0,01; FeCl3·6Н2О — 0,001; агар — 12. Среду простерилизовать.

Среда Ресселя. На 1 л дистиллированной воды: пептон - 5 г, лактоза - 10 г, глюкоза - 1 г, агар - 10 г, индикатор Андреде 40 мл. рН 7,3 ± 0,1.  Среду варят, фильтруют, разливают по 5-7 мл в стерильные пробирки и стерилизуют при давлении 0,5 атм 20 мин. Готовую среду после стерилизации скашивают так, чтобы получить столбик или косяк. Среда светлая. Среду можно готовить на 1,0-1,3% питательном агаре, добавляя к нему в соответствующих концентрациях углеводы и индикатор Андреде.

Среда с желатиной. К мясопептонному бульону или бульону Хоттингера прибавляют мелко нарезанную желатину из расчета 10-15 г на 100 мл (летом концентрацию желатины увеличивают до 20%). Желатине дают набухать в течение 30 мин. и затем растворяют при медленном нагревании в водяной бане при температуре (45 ± 5)°. Устанавливают рН 7,1 ± 0,1, прибавляя к расплавленной желатине 10%-й раствор двууглекислого натрия. При более щелочной реакции желатина застывает плохо, а иногда и совсем не застывает. В 1 л растворенной желатины вносят для просветления два взбитых с небольшим количеством дистиллированной воды яичных белка. Смесь перемешивают и прогревают текучим паром в течение 20 мин. до полного свертывания белка и просветления среды. Затем среду фильтруют в горячем состоянии через бумажный или ватно-марлевый фильтр с большой поверхностью. Среду, разлитую по 5-8 мл в пробирки, стерилизуют при давлении 0,5 атм 20 мин. После стерилизации среду охлаждают путем погружения пробирок в холодную воду в строго вертикальном положении, чтобы верхняя часть столбика при застывании оставалась совершенно ровной.

Среда Фриза. На 1 л дистиллированной воды: C4H4OKNa·4H2O — 5 г, глюкоза — 20 г, пептон — 2,62 г, MgSO4·7H2O — 0,5 г, NaCl — 0,1 г, CaCl2 — 0,1 г, FeCl2 — 10 капель (1%-ный раствор), витамин В6 — 5 мкг, агар — 15 г. Режим стерилизации: 0,5 атм, 40 минут.

Среда Хью-Лейфсона. На 1 л дистиллированной воды, г: пептон — 2; натрия хлорид — 5; двузамещенный фосфат калия — 0,3; глюкоза — 10; бромтимоловый синий — 0,03; агар — 3. рН 7,1 ± 0,1. К воде добавляют пептон, натрия хлорид и агар. Смесь подогревают до расплавления агара, затем вносят фосфат калия и глюкозу, продолжают кипятить 2-3 мин. Смесь подщелачивают 20%-м раствором едкого натрия до рН 7,4 ± 0,1, доводят объем среды до первоначального и добавляют 3 мл 1%-го водного раствора бромтимолового синего. Затем среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают по 4 - 5 мл в стерильные пробирки и стерилизуют при давлении 0,5 атм 20 мин. Цвет среды до стерилизации синий, а после автоклавирования травянисто-зеленый, рН 7,1 ± 0,1. При кислой реакции среда желтеет.

Среда Чапека. Среда синтетическая, твёрдая, элективная. На 1 л дистиллированной воды, г: глюкоза — 14; CaCO3 — 0,7; KNO3 — 0,7; MgSO4 — 0,35; NaCl — 0,35; K2HPO4 — 0,35; FeSO4 — следы; агар — 20. Агар отдельно растворяют в 300 мл воды. Затем всю смесь кипятят, разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве. Используют для  выращивания актиномицетов.

Среда Чапека с крахмалом. На 1 л дистиллированной воды, г: крахмал растворимый — 30; NaNO3 — 2; K2HPO4 — 1; MgSO4·7H2O — 0,5; KCl — 0,5; FeSO4 — 0,01; агар — 20. Приготовление среды: навески компоненты добавляют в дистиллированную воду и смешивают с агаром. Среду переливают в колбу объемом 2 л и на водяной бане разогревают до растворения крахмала и агара (периодически помешивая), закрывают ватно-марлевой пробкой или фольгой и автоклавируют при давлении 1,5 атм в течение 30-40 минут.

Среда Чу №10. Для культивирования цианобактерий рекомендуется среда Чу № 10. На 1 л раствора, г: Ca(NO3)2 — 0,04; MgSO4·7H2O — 0,025; KH2PO4 — 0,01; Na2CO3 — 0,02; Na2SiO3·9H2O — 0,025; FeCl3·6Н2О — 0,0008 (также можно заменить хелатом железа). 

Среда Эндо. Среда синтетическая, твердая, элективная. На 1 л дистиллированной воды, г: пептон — 10, лактоза — 10, K2HPO4 — 3,5, NaHSO3 — 2,5, агар — 15,0. К среде добавляют 4 мл 10 %-ного спиртового раствора основного фуксина, поэтому она окрашивается в розово-кремовый цвет. Среду стерилизуют в автоклаве и сохраняют в темноте. Используют для выращивания кишечной палочки. Бактерии из рода Escherichia на этой среде образуют малиновые колонии с металлическим блеском.

Среды Гиса. К 100 мл 1%-й пептонной воды (рН 7,3 ± 0,1) без селитры добавляют 0,5-1% необходимого углевода или спирта (L-арабиноза, D-манноза, D-сахароза, D-маннит, L-инозит, D-глюкоза, растворимый крахмал и др.) и 1% индикатора Андреде или 0,1 мл 1,6%-го раствора бромтимолового синего. Среды разливают в стерильные пробирки с поплавками и стерилизуют при 0,5 атм 20 мин; среду с L-арабинозой следует стерилизовать в течение 20 мин при 0,1-0,2 атм. Для приготовления сред Гисса можно применять только перечисленные изомеры углеводов. Готовые среды Гисса с индикатором Андреде светлые, при кислотообразовании краснеют. Среды с бромтимоловым синим зеленого цвета с травянистым оттенком, при кислой реакции — желтого цвета, при щелочной — синего.

Среды с желчью. К простым средам добавляют желчь в количестве 10-40% объема среды, устанавливают нужный рН и стерилизуют 20 мин при 120°. Можно стерильную желчь добавить к стерильной среде в асептических условиях.

Среды с кровью. Готовят из стерильных простых сред, добавляя в асептических условиях (лучше в боксе) от 3 до 30% (обычно 5%) стерильной дефибринированной крови. Агаровые среды перед этим растапливают и остужают до 45°. При нужной температуре должно быть терпимое ощущение горячего, но не ожога. После добавления крови, пока среда не застыла, содержимое сосуда тщательно перемешивают и разливают в чашки или пробирки. Внимание! Среды с кровью растапливать нельзя — кровь изменит свои свойства.

Среды с сывороткой крови. Готовят так же, как среды с кровью. К основным средам добавляют 10-20% сыворотки, не содержащей консерванта и предварительно инактивированной при 56° в течение 30 мин на водяной бане или инактиваторе. При инактивации разрушается вещество (комплемент), губительно действующее на микробы.

Среды с углеводами. К основному бульону или расплавленному агару прибавляют нужное количество (0,1-2%) определенного углевода (например, глюкозы). После его растворения разливают в стерильную посуду и стерилизуют текучим паром. Поскольку углеводы частично разрушаются даже при таком режиме стерилизации, предпочтительнее 25-30% раствор углеводов, простерилизованный через бактериальный фильтр, добавлять в нужном объеме с соблюдением асептики к стерильным основным средам. После контроля стерильности среда готова к употреблению.

Сусло-агар. На 1 л 7%-ного пивного сусла — 20 г агара. Приготовление среды: к 1 л неохмеленного 7%-ного пивного сусла (вместо воды) прибавляют 20 г агара, растворяют при нагревании. Стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм. 30 мин.

Щелочной мясопептонный агар. На 1 л мясной воды, г: пептон — 10; натрия хлорид — 5; агар — 20. рН 8,0 ± 0,2.  В мясную воду вносят пептон и хлорид натрия. Смесь перемешивают и подщелачивают 20%-м раствором едкого натра до рН 8,3 ± 0,1. Затем добавляют агар и содержимое помещают в автоклав для варки среды в начале текучим паром в течение 30-40 мин, а затем при 1 атм 20 мин. Если мясопептонный агар варят на плите, среду кипятят до полного расплавления агара при постоянном помешивании.  Для получения прозрачной агаровой среды ее после варки с целью отстоя на 2-3 ч оставляют в автоклаве или помещают в термостатную комнату при температуре 43 ± 2°, лучше время отстоя продлить до 18-20 ч. Отстоявшийся агар осторожно, не взбалтывая, сливают с осадка на плотный ватно-марлевый фильтр. В фильтрате уточняют реакцию среды, если требуется, подкисляют ее, но подщелачивать агар на данном этапе не рекомендуется во избежание выпадения осадка при стерилизации готовой среды. Профильтрованный агар разливают в посуду и стерилизуют при 1 атм 20 мин.

Источники: med-books.info, referat.yabotanik.ru, zakonprost.ru, practice.biotechnolog.ru, agrosbornik.ru, docload.ru, neznaniya.net

 

 

 

Категория: Питательные среды | Добавил: Irina (16.07.2013)
Просмотров: 3817 | Комментарии: 1 | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
Имя *:
Email *:
Код *:
Вход на сайт
Поиск
Друзья сайта
  • Официальный блог
  • Сообщество uCoz
  • FAQ по системе
  • Инструкции для uCoz