Средоварка

Сайт о промышленной биотехнологии

Понедельник, 21.01.2019, 02:16
Меню сайта
Категории раздела
Строение клетки [2]
Микроорганизмы [4]
Стерилизация [6]
Питательные среды [4]
Практические занятия [7]
Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0
Главная » Статьи » Микробиология » Практические занятия

Свечение микробов. Разложение белков и углеводов

Свечение микробов. Разложение белков и углеводов

Стерилизация. Автоклав
Получение чистых культур
Части клетки. Окраска по Граму
Рассмотрение посевов. Бактерии, грибы, простейшие
Пересев. Приготовление мазков
Обращение с микроскопом

 

 

Свечение микробов. Занимающиеся получают чашки Петри, гдеуже проросли колониями (см. стр. 53) засеянные персоналом кафедры культуры одного из видов светящихся бактерий (см. стр. 82), и пробирки с культурами этих же бактерий на косом агаре. Культуры бактерий смываются с косого агара физиологическим раствором (5-7 см3) в стерильные пробирки, а посевы на чашках остаются нетронутыми. Комнату основательно затемняют, и спустя 3-5 мин., когда глаз привыкнет к темноте, можно наблюдать, что на чашках находятся слабо светящиеся кружочки (колонии бактерий), а в пробирках заключена светящаяся жидкость, интенсивность свечениякоторой усиливается при встряхивании (в силу усиления аэрации).

Образование пигмента. Для иллюстрации изложенного на стр. 79 занимающимся передается культура пигментообразующих бактерий Staphylococcusaureus и В. pyocyaneus.

Разложение белков. Образование индола. Как можно убедиться из сказанного на стр. 78-79, большое количество бактерий разлагает белковые вещества, что обнаруживается появлением в среде продуктов их распада. Медицинская микро­биология особенно часто прибегает к открытию, как продукта разложения белков, индола, что дает возможность наряду с другими отличительными признаками диференцировать одни виды бактерий от других. Так например В. colicommunis разлагает белки с образованием индола, а близкий ей В. typhi не имеет этой способности. Обнаружение индола производится так: в старую культуру В. coli на бульоне, доставляемую занимающимся (2-3, а еще лучше 5-7-суточную), вносят 1 см3 0,02% раствора азотнокислого натрия и потом 1 см3 25% серной кислоты, после чего вслед за взбалтыванием культура получит розовато-красное окрашивание, указывающее на присутствие индола. Механизм реакции таков: серная кислота разлагает азотнокислый натрий с освобождением азотной кислоты, которая при соединении с индолом, если таковой имеется в среде, образует цветное соединение розовато-красного цвета.

Разложение углеводов. Медицинская микробиология в целях распознавания микроорганизмов использует описанное на стр. 77-78 свойство бактерий одного вида разлагать тот или иной углевод при инертности к нему бактерий другого вида. Так например для диференцировки бактерий в группе coli-typhus особенно важное значение имеют отношения различных бактерий этой группы к молочному и виноградному сахарам. Действительно, лишенная патогенности В. colicommunis разлагает молочный сахар, тогда как ни один патогенный вид этой группы (В. typhiabdom., В. paratyphi, А, B, С (N) и В. dysenteriae) не разлагает этого углевода. Занимающиеся получают в свои руки чашки Петри с агаром Дригальского и Эндо (о них подробно см. главу XXIX), в состав которых входит молочный сахар, и засевают их смесью В. coliи В. typhi так, как описывается ниже (методы получения чистых культур). Индикаторы (лакмус в среде Дригальского, фуксин в среде Эндо), добавленные к этим питательным средам, покажут, что через 24 часа в области роста колонии В. coli, разлагающей молочный сахар с образованием кислоты, среда Эндо стала красной с металлическим блеском фуксина, а среда Дригальского — розово-красной, тогда как в области роста В. typhi первоначальный цвет среды остался неизмененным.

Виноградный сахар с образованием кислоты и газообразных продуктов разлагается В. paratyphi А и В, тогда как В. typhi разлагает этот углевод лишь с образованием кислот; поэтому если в агар с виноградным сахаром, разлитый в пробирку столбиком, посеять уколом В. paratyphi А или В, то через 2 часа столб агара будет разорван газом на отрезки, чего не произойдет в пробирке с такой же средой при посеве В. typhi. Если к агару с виноградным сахаром добавить краску Neutralrot(нейтральную красную), то одновременно с явлениями, описанными выше, в той пробирке, где растут В. paratyphiА и В, эта краска окажется редуцированной и среда вместо красной станет оранжево-желтой и будет флуоресцировать в падающем свете, тогда как среда, засеянная В. typhiabdominalis,останется по-прежнему вишнево-красной.

Таким образом на этой среде, которая называется агаром Ротбергера, мы убеждаемся в том, что В. paratyphiА и В одновременно и разлагает виноградный сахар с образованием газообразных веществ и редуцирует нейтральную красную краску, тогда как В. typhiне в состоянии сделать ни то, ни другое (в верхней части агара Ротбергера редукция нейтральной красной краски может отсутствовать, так как кислород воздуха восстанавливает цвет краски).  

В стерилизованное снятое молоко засевают В. coli, В. typhiabdominalisи В. paratyphiВ. По истечении 24 час. молоко первой пробирки окажется свернувшимся в силу наличия кислоты, образовавшейся благодаря разложению молочного сахара, обусловленному В. coli. В то же самое время пробирки с молоком, в которые были посеяны В. typhiabdominalisи В. paratyphiВ, останутся неизмененными, но в то время, когда пробирки с В. typhiнавсегда остаются в одном и том же состоянии, молоко в пробирках с В. paratyphiВ через 7-10 час. станет желтоватого, а затем буроватого цвета в силу омыления содержащихся в молоке жиров или образования щелочного альбумината.

С той же диагностической целью используют молочную сыворотку для распознавания В. paratyphiА от В, имея в виду различное отношение обеих бактерий к декстрозе, содержащейся в молоке. Эти моменты подробно изложены в главе XXIX.

Образование токсинов.Токсины, выделяемые бактериями в окружающую среду (экзотоксины) (см. стр. 79-80), могут быть обнаружены по тому действию, которое они производят либо на организм животного, либо на изолированные клетки последнего (эритроциты, белые клетки крови). Для демонстрации действия экзотоксинов на организм животного мы изучаем токсин столбнячной бацилы.

Под кожу около корня хвоста животного вводят 1-3 минимальных смертельных дозы (D. l. m.), а через 24-48 час. и в последующие дни занимающиеся являются свидетелями тех явлений в организме мыши, которые подробно описаны в главе XXXIII.

Для изучения токсического эфекта экзотоксина на клетки животных поступают следующим образом. На чашках Петри с агаром, к которому прибавлена дефибринированная кровь любого животного, делают посев гемолитического стрептококка петлей, например в виде буквы С или какой-либо другой; через 24 часа вокруг выросших стрептококков наблюдают прозрачную лишенную пигмента эритроцитов зону среди непрозрачного красного поля, соответствующую этой букве, так как токсин, образованный стрептококками, дифундирует и разрушает эритроциты.

Категория: Практические занятия | Добавил: Irina (04.06.2013)
Просмотров: 942 | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
Имя *:
Email *:
Код *:
Вход на сайт
Поиск
Друзья сайта
  • Официальный блог
  • Сообщество uCoz
  • FAQ по системе
  • Инструкции для uCoz