Средоварка

Сайт о промышленной биотехнологии

Понедельник, 21.01.2019, 03:20
Меню сайта
Категории раздела
Строение клетки [2]
Микроорганизмы [4]
Стерилизация [6]
Питательные среды [4]
Практические занятия [7]
Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0
Главная » Статьи » Микробиология » Практические занятия

Получение чистых культур

Получение чистых культур

Стерилизация. Автоклав
Свечение микробов. Разложение белков и углеводов
Части клетки. Окраска по Граму
Рассмотрение посевов. Бактерии, грибы, простейшие
Пересев. Приготовление мазков
Обращение с микроскопом

Методы получения чистых культур (Ausgiess,т. е. метод розлива, и Ausstrich, т. е метод распределения). До настоящего времени занимающиеся получали в свое распоряжение чистые культуры бактерий, т. е. бактерии одного вида без примеси бактерий посторонних видов. Сейчас каждый студент должен самостоятельно овладеть методом изолирования бактериального вида из смеси ряда видов — получить чистую культуру. В бактериологической практике пользуются двумя методами.

Наиболее сложным является метод, введенный в нашу науку Кохом (метод Ausgiess). Пользуясь им, поступают следующим образом. Разжижают три пробирки (помеченные №№ 1, 2 и 3) с агаром (по 10 см3) при кипячении их на водяной бане, а затем последнюю охлаждают до 50° — температура, при которой эта среда остается еще жидкой. Одновременно вблизи водяной бани на столе помешают рядом три стерильные чашки Петри, также отмеченные №№ 1, 2 и 3. Одну петлю нз бактериальной смеси (кал, гной или мокрота, растертые в физиологическом растворе, или обычно занимающимся предлагается смесь Staphilococcus aureus и Vibrio metschnikovi) переносят в пробирку № 1 и содержимое петли тщательно, но возможно непродолжительное время распределяют в пробирке, перекатывая последнюю между ладонями (но не взбалтывая, так как при этом образуются пузырьки воздуха). После этого одну петлю содержимого вносят из этой пробирки в пробирку № 2, которую также перекатывают между ладонями для равномерного распределения бактерий; из пробирки № 2 в свою очередь извлекают петлей содержимое и переносят его в пробирку № 3, с которой для равномерного распределения бактерий поступают так же, как описано выше. Все эти манипуляции производят, как сказано, очень быстро, так как в противном случае агар может застыть. Кроме того, чтобы воспрепятствовать застыванию агара, после того как из пробирки содержимое петли перенесено в другую, предшествующая пробирка вновь помещается в водяную баню. Проделав все описанное, мы достигли того, что во второй пробирке бактерий оказалось меньше, чем в первой, а в третьей еще меньше, чем во второй, причем в силу вязкости агара бактериальные индивиды второй пробирки оказались отделенными друг от друга на большее расстояние, нежели в первой, а в третьей — на большее, чем во второй. Это подтверждается при изучении через 24 часа содержимого чашек Петри, куда соответственно проставленным на их крышках номерам последовательно и очень быстро, приоткрыв сбоку чашку, выливают (отсюда — метод Ausgiess, что в переводе означает выливание) (рис. 65)содержимое каждой пробирки, а затем, закрыв крышкой чашку, слегка приподнимая и опуская чашку то одной, то другой стороной, равномерно распределяют в ней вылитый агар, не допуская образования плешей, т. е. мест, лишенных агара, ни по периферии, ни в середине чашки.

Другой метод изолирования бактериальных видов из смеси состоит в следующем. Питательная среда (агар, желатина) разливается по трем чашкам Петри (№№ 1, 2 и 3). Если среда в них не была подсушена зарание для удаления избытка конденсационной воды (которая образуется при охлаждении агара или желатины в силу выделения из них), то последняя должна быть устранена сейчас. Для этого после снятия крышек с чашек со средой последние ставят вверх дном на 1-2 часа в термостат при 37°, что обеспечивает испарение конденсационной воды при сохранении стерильности среды. Вслед за этим по извлечении из термостата на чашки вновь надевают крышки и на среду в чашке №1 наносят одну каплю предварительно растертого кала, гноя, мокроты или бактериальной смеси и размазывают ее по всей поверхности среды (рис. 67) (метод Ausstrich, что в переводе означает размазывать) стеклянным шпателем, изображенным на рис. 66.

Тем же шпателем, не прокаливая его на огне, производят втирание оставшегося на нем материала по всей поверхности чашки Петри № 2, а затем им же, также не проводя через огонь, — по поверхности среды чашки № 3. После окончания втирания материала чашки Петри с закрытыми крышками ставят в термостат на 24 часа, а шпатель стерилизуют в пламени.


По истечении этого времени в чашках на агаре прорастут в виде колоний вcе бактериальные виды, которые были в смеси. Какой бы метод ни применялся для получения чистых культур, на среде в чашке № 1 количество колоний будет так велико, а расстояние между ними так ничтожно (возможно, что колонии будут даже слиты друг с другом), что окажется очень трудно или даже невозможно прикоснуться петлей к одной колонии, не задев ею соседней колонии. На чашке № 2 эту операцию гораздо легче провести, а на чашке № 3 колоний будет мало и они окажутся настолько далеко расположенными друг от друга, что снять петлей материал с одной бактериальной колонии без опасности затронуть соседнюю станет очень легко.


Взятый с колонии материал (рис. 72) засевается на косой агар или бульон с полной уверенностью, что размножившиеся (рис. 68) через 18-24 часа бактерии окажутся чистой культурой того или иного вида, являющейся потомком одной бактериальной клетки, из которой произошла колония на чашке Петри.

Если это упражнение проведено с рекомендуемой бактериальной смесью из Staphylococcus aureus и Vibrio metschnikovi, то при определении вида, к которому принадлежат колонии, руководствуются следующими отличительными признаками. Стафилококкам будут принадлежать колонии белого цвета (пигмент приобретается лишь при пребывании в комнатной температуре), непрозрачные в проходящем свете, а колонии голубовато-серого цвета в падающем свете и прозрачные при проходящем принадлежат V. cholerae. Если оставить чашки в комнатной температуре, то колонии стафилококка через несколько дней приобретут золотисто-желтый цвет.


 

Категория: Практические занятия | Добавил: Irina (09.06.2013)
Просмотров: 1385 | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
Имя *:
Email *:
Код *:
Вход на сайт
Поиск
Друзья сайта
  • Официальный блог
  • Сообщество uCoz
  • FAQ по системе
  • Инструкции для uCoz