Средоварка

Сайт о промышленной биотехнологии

Понедельник, 21.01.2019, 02:03
Меню сайта
Категории раздела
Строение клетки [2]
Микроорганизмы [4]
Стерилизация [6]
Питательные среды [4]
Практические занятия [7]
Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0
Главная » Статьи » Микробиология » Практические занятия

Стерилизация. Автоклав

Стерилизация. Автоклав

Получение чистых культур
Свечение микробов. Разложение белков и углеводов
Части клетки. Окраска по Граму
Рассмотрение посевов. Бактерии, грибы, простейшие
Пересев. Приготовление мазков
Обращение с микроскопом

Стерилизация спорогенного и неспорогенного материала. Если вегетативные тела бактерий могут быть уничтожены, смотря по принадлежности их к тому или   иному виду, через известный, относительно короткий промежуток времени при высокой температуре в пределах атмосферного давления, существующего на земной поверхности, то это далеко не всегда имеет место в том случае, если бактериальный вид снабжен спорами. Быстрое уничтожение спор возможно как правило при высоких температурах (115-135°), осуществляемых при повышенном атмосферном давлении, достигаемом в особых аппаратах, построенных по типу котла Папина — так называемых автоклавах. Чтобы убедиться в этом, студенты получают по две пробирки или колбы: одну с V. cholerae asiaticae, другую с В. subtilis или В. mesentericus.

Обе пробирки прогревают на водяной бане или в автоклаве (рис. 69) с незавинченной крышкой1 в течение 1 часа при 100° (кипение), а затем содержимое их засевают на агар или бульон. После этого крышку автоклава закрепляют, крепко привинчивают ее винтами и повышают температуру до 120° (при давлении по манометру около двух атмосфер) , которую поддерживают в течение 15-30 мин. Затем, прекратив нагревание автоклава и выждав, когда стрелка манометра опустится до нуля, медленно открывают кран и выпускают пар, после чего отвинчивают его крышку и, извлекши обе пробирки или колбы, делают вновь посев из каждой пробирки, resp. колбы, на те же среды.

Если через 24 часа исследовать сделанные посевы, то окажется, что после прогревания культур в течение 1 часа при 100° убитыми оказались лишь V. cholerae, а В. subtilis или В. mesentericus дали пышный рост, так как при этой температуре были уничтожены лишь вегетативные тела, а споры, имеющиеся лишь у В. subtilis или В. mesentericus, остались живыми. При прогревании же культур V. cholerae и В. subtilis или В. mesentericus в в течение 15 мин. при 120° стерильными оказались как пробирки с агаром, засеянным из пробирки или колбы с V. cholerae, так и пробирки, на которые было посеяно содержимое пробирок или колб с В. subtilis или В. mesentericus, так как в этих условиях были убиты и споры.

1Крышка имеет: 1) закрывающуюся краном трубка для выхождения водяных паров и воздуха, 2) манометр и термометр, указывающие атмосферное давление и температуру внутри автоклава, и 3) предохранительный клапан, автоматически выпускающих пар, когда давлени внутри автоклава настолько повысится, что создается угроза разрыва стенок аппарата.

Автоклав (рис. 69). При пользовании автоклавом надо иметь в виду cледующее. На дно автоклава наливается вода, уровень которой должен не доходить до той подставки, на которую помещаются стерилизуемые объекты. Крышка автоклава, если имеют в виду поднять температуру выше 100°, как раньше указывалось, крепко привинчивается винтами, после чего под автоклавом зажигается примус или газ. Надо быть уверенным, что все внутреннее пространство автоклава, в котором находятся стерилизуемые объекты, имеет ту температуру, которую показывает термометр: это налицо только в том случае, если воздух в автоклаве вытеснен целиком (воздух — плохой проводник тепла) паром, что сигнализируется выделением сильной струи последнего, начинающей со свистом вырываться из трубки. Только при этом условии закрывают кран этой трубки, после чего стрелка манометра начинает показывать постепенное повышение атмосферного давления. Отмечают время, когда стрелка достигнет 2 атмосфер, что укажет на необходимое для наших целей повышение атмосферного давления сверх нормального и на соответствующую ей температуру внутри автоклава в 120° (точнее в 121,4°). Через 15-30 мин. после этого стерилизацию можно считать оконченной. Прекращают нагревание и ожидают, когда стрелка манометра опустится до 0, и лишь тогда медленно открывают кран и выпускают пар, после чего крышка отвинчивается и извлекается содержимое автоклава.

Сухой стерилизатор (рис. 70). В противоположность описанной стерилизации паром целый ряд объектов можно стерилизовать сухим жаром, если они от него не подвергаются порче (например стеклянная посуда). Для этой цели служит шкаф с двойными металлическими (железо, медь) стенками, между которыми циркулирует воздух; наружная сторона его обложена асбестом, чтобы замедлить потерю тепла, доставляемого аппарату керосиновой лампой (примусом), газом или электричеством. Вверху аппарата помещается термометр, показывающий температуру внутри шкафа. Стерилизацию посуды (причем пробирки и колбы снабжаются ватными пробками, чашки Петри и пипетки помещаются в металлические пеналы или заворачиваются в бумагу) проводят при 170° в течение 2 часов.


Фильтрование через свечу (рис. 71). Целый ряд объектов не может подвергаться стерилизации ни высокой температурой, ни воздействием на них дезинфицирующих веществ, так как с этим связана денатурация этих сред. В таких случаях применяют фильтрование через так называемые бактериальные свечи (из необожженной глины, инфузорной земли или асбеста) (рис. 11 и 12), задерживающие в своих порах бактерии и не пропускающие их в фильтрат.

Как показано на рис. 71, бактериальная свеча с ватной пробкой вставлена и укреплена в стеклянный приемник, снабженный двумя боковыми трубками, закрытыми ватными пробками (свеча и приемник стерилизованы); одна трубка соединяется с насосом, разрежающим воздух (в расширении этой трубки также помещена вата), а через другую после окончания фильтрования ее содержимое переливается в стерильные пробирки.


При работе с аппаратом поступают так. Вынув пробку из свечи, наливают в нее тот материал, который желают освободить от бактерий (мы предлагаем студентам бульонную культуру Staphylococcus aureus), соединяют трубку с насосом, после чего жидкость начинает медленно поступать в приемник, так как воздух своим давлением вытесняет ее из свечи в сосуд, где давление теперь уже ниже атмосферного). Когда вся жидкость собралась в приемнике, последний разъединяют от разрежающего насоса, извлекают пробку из другой трубки, обжигают последнюю на огне и переливают с известными уже предосторожностями для сохранения стерильности профильтрованную жидкость в стеклянную пробирку. Затем извлекают петлей из пробирки материал и переносят его на поверхность косого агара, который спустя 24 часа после пребывания в термостате (рис. 72) при 37° исследуют на стерильность.

 

Категория: Практические занятия | Добавил: Irina (14.06.2013)
Просмотров: 1310 | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
Имя *:
Email *:
Код *:
Вход на сайт
Поиск
Друзья сайта
  • Официальный блог
  • Сообщество uCoz
  • FAQ по системе
  • Инструкции для uCoz