Средоварка

Сайт о промышленной биотехнологии

Понедельник, 21.01.2019, 02:23
Меню сайта
Категории раздела
Строение клетки [2]
Микроорганизмы [4]
Стерилизация [6]
Питательные среды [4]
Практические занятия [7]
Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0
Главная » Статьи » Микробиология » Практические занятия

Пересев. Приготовление мазков

Пересев. Приготовление мазков

Стерилизация. Автоклав
Получение чистых культур
Свечение микробов. Разложение белков и углеводов
Части клетки. Окраска по Граму
Рассмотрение посевов. Бактерии, грибы, простейшие
Обращение с микроскопом

 

 

Обращение с бактериальными культурами и пересев с твердых и жидких сред. На практических занятиях студент получает бакте­риальные культуры в пробирках на питательных средах либо с целью извлечь оттуда необходимые для исследования микроорганизмы, либо для пересева их с одной среды на другую.

То и другое производится при помощи платиновой проволоки в виде иглы или петли (рис. 53), допускающей быструю стерилизацию на огне (скоро накаливается и так же скоро остывает) без повреждения металла. При этом петлю или иглу держат в пламени вертикально, для того, чтобы проволока на всем протяжении была одновременно добела накалена (рис. 54). Затем слегка обжигают и ближайший к проволоке отрезок стеклянной или металлической палочки, в которую она впаяна или заделана Надо обратить внимание, чтобы до внесения в огонь стеклянная палочка была совершенно суха, так как в противном случае стекло трескается и петля (игла) из него выпадает.


 

Лишь после такой стерилизации петля или игла может быть внесена в пробирку с культурой. При этом, прежде чем захватить платиновой иглой или петлей часть бактериальной культуры, ею касаются части среды, свободной от бактериального налета (если имеют дело с твердой средой), чтобы удостовериться, что платиновая проволока достаточно остыла (если проволока имеет еще слишком высокую температуру, то среда на данном участке с треском расплавляется или кипит). Этим создается гарантия, что бактерии, снятые проволокой, будут вполне жизнеспособны.
Бактерии засевают на твердые (например желатина, агар) или жидкие питательные среды (например бульон, молоко, молочная сыворотка и т. п.). Твердые среды засевают петлей по их поверхности, стараясь использовать по возможности всю среду целиком. В том случае, если предстоит посев анаэробов, то его производят уколом зараженной бактериями иглы в центральную часть среды, застывшей в виде столбика (агар или желатина столбиком) (рис. 56). Если необходимо посеять бактерии на жидкую среду, то инфицированную ими платиновую петлю или иглу погружают в среду.

 

 

 

Помимо извлечения материала для исследования под микроскопом платиновой петлей или иглой пользуются и для посева на еще стерильные среды, извлекая ею бактериальный материал из другой пробирки с ранее засеянной средой, соблюдая при этом строжайшие меры предосторожности против загрязнения микроорганизмами со стороны.

 

 

Необходимо описать подробно, как при этих условиях следует манипулировать с двумя пробирками. Обе пробирки в возможно более горизонтальном положении помещают между большим и остальными пальцами левой руки, причем пробирку с культурой следует держать ближе к себе, нежели пробирку с еще стерильной средой. Свободной правой рукой извлекаются ватные пробки, которые помещаются своими выстоящими за края пробирок концами — одна между безыменным и средним пальцем, а другая между средним и указательным (рис. 55).

 

После этого прокаливают на горелке петлю или иглу, а затем обжигают верхние концы пробирок, так как последние могут быть бактериально загрязнены. Затем платиновой проволокой забирают ничтожную часть бактериальной культуры и вносят во вторую пробирку со стерильной средой для ее засева, который производится так, как описано выше. Платиновая игла стерилизуется на огне и откладывается в сторону, а края пробирок вновь обжигаются, после чего в последние вставляются взятые предварительно в правую руку и быстро проведенные через огонь своими нижними концами ватные пробки. Если одна из двух пробирок или обе наполнены жидкой питательной средой, то требуется, в особенности для начинающих, сугубое внимание, чтобы при горизонтальном положении пробирок не вылить находящееся в них содержимое.

Только что описанным путем пересевают на агар и бульон Staphylococcus aureus и Streptococcus haemolyticus на агар и уколом в желатину В. соli, В. subtilis и V. metschnikovi, на агар Spirillum volutans. Посевы переносят в термостат (рис. 72) на 18-24 часа.

 

 

Приготовление, фиксация и окраска мазков.

Извлекают, как описано выше, петлей последовательно из заготовленных накануне для практических занятий пробирок с чистыми культурами перечисленных сейчас бактерий. Самое незначительное количество материала достаточно, чтобы бактериальной массой была заполнена совсем небольшая часть окошечка петли или ею был покрыт кончик иглы. Взятый бактериальный налет растирается платиновой проволочкой в капле воды, предварительно нанесенной на чисто промытое и обезжиренное (иначе капля станет расплываться) предметное стекло, так, чтобы мазок был не толст и имел приблизительно такой вид, как на рис. 57. Платиновая петля или игла после этого прокаливается. Мазок, как только он подсох на воздухе, фиксируют на огне путем проведения его три раза мазком вверх через пламя горелки.


Фиксация, как ясно из названия, имеет целью убить бактерии высокой температурой, закрепив одновременно ее же действием в силу свертывания протоплазмы прижизненную форму микробов и их строение, и прикрепить в то же время мазок к стеклу, чтобы он не был смыт последующими манипуляциями. В тех случаях, когда нужно закрепить (фиксировать) структуру микроорганизмов, разрушаемых при фиксации высокой температурой, мазки фиксируют не на огне, а в тех или иных химических веществах, свертывающих колоиды протоплазмы (спирт, эфир, сулема и т. п.).


Вслед за фиксацией приступают к окраске препарата, наливая на мазок несколько капель разведенного фуксина (приготовляется персоналом кафедры) и оставляя на нем 3 мин. Затем краску сливают и остаток ее удаляют под несильной струей воды (рис. 58) (не смыть мазка). Мазок подсушивают между листками фильтровальной бумаги, сложенной так, как показано на рис. 57. Чтобы удалить остатки воды, стекло с мазком держат несколько секунд высоко над пламенам горелки. На препарат опускают каплю кедрового масла, и он готов к исследованию под микроскопом с масляной иммерсионной системой (обратить внимание, чтобы по ошибке вместо иммерсионной системы не была использована сухая система и чтобы масло было нанесено на мазок, а не на обратную сторону стекла).


Изучают форму бактерий, пользуясь при этом текстом на стр. 38—41 и в главах XXIX и ХL и рисунками. Следует иметь в виду, что В. anthracis, изображенный на рис. 17, очень близок по форме В. subtilis, а V. metschnikovi — V. cholerae asiaticae (рис. 20).

Затем приступают к исследованию уже готовых препаратов, демонстрирующих полиоморфизм (инволюционные формы) бактерий, используя текст стр. 51 и имея в виду рис. 32—38.


Категория: Практические занятия | Добавил: Irina (24.05.2013)
Просмотров: 2371 | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
Имя *:
Email *:
Код *:
Вход на сайт
Поиск
Друзья сайта
  • Официальный блог
  • Сообщество uCoz
  • FAQ по системе
  • Инструкции для uCoz