Средоварка

Сайт о промышленной биотехнологии

Понедельник, 21.01.2019, 02:18
Меню сайта
Категории раздела
Строение клетки [2]
Микроорганизмы [4]
Стерилизация [6]
Питательные среды [4]
Практические занятия [7]
Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0
Главная » Статьи » Микробиология » Практические занятия

Рассмотрение посевов. Бактерии, грибы, простейшие

Рассмотрение посевов. Бактерии, грибы, простейшие

Стерилизация. Автоклав
Получение чистых культур
Свечение микробов. Разложение белков и углеводов
Части клетки. Окраска по Граму
Пересев. Приготовление мазков
Обращение с микроскопом

Рассмотрение посевов. Изучают внешний вид культур (Staphylococcusaureus и Streptococcushaemolyticus на агаре и бульоне (см. главы XXII и XXIII), В. соli, В. subtilis и V. metschnicovi на агаре и желатине (уколом) и культуру на агаре Spirillumvolutans, имея в виду, что V. metschnicoviпо характеру роста не отли­чается от Vcholerae.

(Если после окончания следующих ниже упражнений останется время, реко­мендуется приготовить мазки из культур и, окрасив их на этот раз метиленовой синькой, изучить еще раз под микроскопом.)

Ветвление у бактерий. Приготовляют мазок из культуры В. bifidus, имеющий в виду демонстрировать ветвление бактерий (см. стр. 52 и 53). В. bifidus(в этом отношении он заменяет В. tuberculosis, В. diphteriae и В. mallei, которые обна­руживают ветвление лишь от случая к случаю) — анаэробный микроорганизм, является представителем бактериальной флоры в толстой кишке человека, особенно детей грудного возраста, где он находится в массовом количестве.

Изучение мазков из культур Actinomyces (Streptotrix) должно ознакомить студентов с морфологией лучистых грибов — микроорганизмов, являющихся пере­ходными между бактериями и настоящими грибами и подробно описанных на стр. 54—56. Мазки окрашиваются фуксином.

Стрептотриксы, или лучистые грибы. Как можно убедиться из сказанного на стр. 56 и в главе ХLI, в организме человека и животных Actinomyces помимо отдель­ных гиф,находящихся между клетками, встречается и в виде небольших скоплений – друз. Срез из ткани животного, пораженного актиномикозом. передаваемый на практическое занятие в готовом виде, должен не только помочь изучить строение самой друзы, но и уяснить ее отношение к клеточным элементам животного.

Друза, как описано на стр. 56 и в главе ХLI, построена из гиф, так тесно переплетенных между собой, что даже при тщательном изучении нельзя под микроско­пом увидеть отдельные нити мицелия за исключением периферии, где они обычно колбовидно вздуты и окружают как бы в виде луча (отсюда название —лучистые грибы) центральную часть гриба. Нередко колбовидно вздутые концы гиф окрашены в иной цвет (сине-фиолетовый), что является выражением различия в их химическом составе (срез окрашен гематоксилин-эозином: гематоксилин окрашивает колбовидные вздутия гиф, а эозин — остальную часть гриба, не воспринимающую гематоксилин). Неодинаковый химический состав различных частей гриба зависит от того, что периферические гифы, соприкасающиеся непосредственно с огромным количеством фагоцитарных клеток, стремящихся уничтожить микроб, в процессе защиты изменяют свои физико-химические свойства  в  направлении, могущем обеспечить наиболее угрожаемым частям друзы максимальную устойчивость (стр. 478). Фагоцитарные клетки, как можно убедиться, окружают друзу  очень мощной  зоной, ограждая таким образом здоровые участки ткани от распространения  гриба на тот случай, если их деятельность окажется недостаточной для полной ликвидации микробов. Как дополнительный аппарат защиты на периферии этой зоны из фагоцитов,   представляемых  преимущественно гранулоцитами,  в   целом   ряде   срезов можно видеть полоску из фагоцитарных клеток несколько иного типа — так называ­емых моноцитов (см. главу VIII и стр.477), образующих своего рода вал (так назы­ваемый грануляционный вал).

Нитчатые грибы.Дрожжевые грибы.Aspergillusfumigatus и хлебные или пив­ные дрожжи, которые изучаются живыми и окрашенными метиленовой синькой, знакомят нас с морфологией настоящих грибов и дрожжей (стр. 56—59).

Неокрашенный препарат из живых микроорганизмов приготовляют следующим образом: на предметном стекле в капле воды осторожно растирают культуру Aspergillus или частицу дрожжей и накрывают такой препарат покровным стеклом. Ис­следуют живые грибы с сухими системами — сначала 3, потом 7.

Спирохеты. Спирохеты мы на этом занятии изучаем не живыми, а фиксирован­ными и окрашенными, оставляя их исследование в живом состоянии до изучения соответствующих отделов специальной части микробиологии.

Spirohaetaobermeieri или Sр. duttoni, являющихся возбудителями возвратного тифа, мы исследуем в крови зараженных ими мышей или крыс. Ножницами отре­зается предварительно промытый водой, а потом спиртом кончик хвоста животного примерно на 0,25 см длины; к выступающей сейчас же капле крови прикладывается чистое, тщательно обезжиренное предметное стекло, несколько отступя от одного
из его концов. Оставшаяся на нем капля крови тотчас же размазывается коротким концом другого, лучше с отшлифованными краями предметного стекла; при этом до начала размазывания капли крови следует выждать, пока кровь в силу капилярности распределится между обоими предметными стеклами. Капля крови не должна быть большой, чтобы мазок не был толстым. Все эти технические моменты представлены на рис. 59. Мазки фиксируют в 96° спирту, смешанном пополам с эфиром, в чашке Петри в течение 5 мин., высушивают на воздухе, а затем окрашивают раз­веденным фуксином. При изучении спирохет руководствуются их описанием на стр. 59-60.

Простейшие. Если кафедра не располагает культурами патогенной для чело­века Entamoebadysenteriae, то исследуются живыми Amoebalimax в культуре на агаре или при отсутствии культуры в настое сена. Препарат готовится так же, как препарат из живых грибов, и исследуется сначала сухой системой 3, а затем 7. Каждая амеба нежнозеленоватого цвета, передвигается псевдоподиями, выступающими то в одном, то в другом месте ее тела и имеющими форму, напоминающую палец. Ядро амебы несколько более темного цвета, нежели протоплазма. Желательно сравнить строение и движение исследуемой Amoebalimaxс Entamoebahistolytica, руководствуясь текстом главы ХLV и рис. 322.

Мазки из крови мышеи, зараженных простейшими — Trypanosomaequiperdum, приготовляюттак же, как мазки крови, содержащей спирохеты. Окрашивание их фуксином или метиленовой синькой не позволило бы изучить достаточно сложную структуру этих микробов, и поэтому после фиксирования смесью спирта с эфиром они окрашиваются особой краской, приготовленной по способу Романовского-Гимза, позволяющей   протоплазме, ядрам   и  другим структурным элементам вы­явиться различно окрашенными. К 10 см3 дестилированной воды нейтральной или слабощелочной   реакции непосредственно перед окраской препарата прибавляют 10 капель этой краски, и смесь сейчас же наливается на препарат. Через час краска сливается и препарат промывается, а затем подсушивается на воздухе.   Протоплазма трипаносом и ундулирующая перепонка окрашиваются в сине-голубой цвет, главное ядро — в фиолетово-красный, а блефаробласт и из него выходящая нить, продолжающаяся в жгут, — в яркокрасный цвет.

При изучении трипаносом следует ознакомиться с содержанием стр. 59-63, в отношении Trypanosomaequiperdum иметь в виду следующие моменты.

Этот микроорганизм имеет рыбообразную форму,  но поскольку мы изучаем в плоскости поля зрения микроскопа, постольку он нам представляется виде изогнутого уплощенного образования веретенообразной формы, постепенно суживающегося к обоим концам, причем одна сторона паразита выпукла, а другая вогнута. Паразит имеет два ядра — трофонуклеус (главное ядро)   и  блефаробласт (побочное ядро). От последнего и отходит та нить, которая, пройдя вначале небольшое пространство внутри тела микроорганизма, окаймляет затем ундулирующую   мембрану   трипаносомы и, выйдя   за   границы тела паразита, образует более  или  менее длинный жгут.   Конец тела микроба, из  которого вмступает жгут, условились считать передним.

Протоплазма трипаносом гомогенна и не содержит обычно каких-либо запасных вввеств, за исключением, быть может, зерен волютина, рассыпанных большей частью ближе к переднему концу. Последние особенно часто встречаются у Trypanosomagambiense.

Не диференцируясь   структурно на экто- и эндоплазму, трипаносомы все же отграничены от окружающей среды конденсированной протоплазмой — так называе перипластом, — из которой состоит и ундулирующая мембрана.

Главное ядро, круглое или овальное, имеет оболочку и ядрышко; оно большей частью расположено в центре трипаносомы. Блефаробласт же, находящийся близко около заднего конца паразита, представляет собой обычно небольшое круглое или овальное зернышко.

Деление совершается путем продольного расщепления тела паразита после раз­деления ядра блефаробласта и жгутиковой нити.

Готовые мазки с Plasmodiumvivax, возбудителем трехдневной формы малярии человека, фиксируют так же, как мазки с Trypanosomaequiperdum, и также окра­шивают их по Гимза. При изучении этих микроорганизмов руководствуются изло­женным на стр. 59-63 и в главе XLVII.

 

Категория: Практические занятия | Добавил: Irina (28.05.2013)
Просмотров: 1329 | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
Имя *:
Email *:
Код *:
Вход на сайт
Поиск
Друзья сайта
  • Официальный блог
  • Сообщество uCoz
  • FAQ по системе
  • Инструкции для uCoz